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暗場顯微鏡是一種很好的成像技術，因為(wei) 它允許研究人員觀察樣品中的細節和結構，而這些細節和結構可能很難用其他類型的顯微鏡（例如明場或熒光顯微鏡）看到。

暗場顯微鏡的一些具體(ti) 優(you) 點包括：

1、高對比度：通過從(cong) 側(ce) 麵或背麵照亮樣品，暗場顯微鏡可以在黑暗背景下創建樣品的明亮圖像，從(cong) 而更容易看到使用其他技術可能難以看到的細節和結構。

2、提高分辨率：暗場顯微鏡產(chan) 生的高對比度圖像有助於(yu) 提高圖像的分辨率，使研究人員能夠看到樣品中更小的細節和結構。

3、適用於(yu) 透明樣品：暗場顯微鏡對於(yu) 研究透明樣品特別有用，例如活細胞或小生物體(ti) ，這些樣品很難用其他技術看到。

4、可用於(yu) 多種樣品：暗場顯微鏡可用於(yu) 範圍廣泛的樣品，包括生物、礦物和材料科學樣品。

總的來說，暗場顯微鏡對於(yu) 希望研究透明、低對比度或難以用其他技術觀察的樣品的研究人員來說是一種有價(jia) 值的工具。它可以提供高對比度、高分辨率的圖像，幫助研究人員更好地了解樣本的結構和特性。

暗場顯微觀察是一種利用傾(qing) 斜照明改善常規照明條件下成像質量不佳標本對比度的技術。直射光被聚光鏡內(nei) 的不透明光闌阻擋後，從(cong) 傾(qing) 斜角度穿過樣品的光線經過衍射、折射並反射到顯微鏡物鏡內(nei) ，形成疊加在深色背景上的明亮樣品圖像。這種深色背景能夠提供較高的對比度，並且輕鬆讓背景效果不佳的標本更加突出。下麵是一些圖片示例。

暗場顯微鏡x1000所見紅細胞

暗場顯微鏡圖像——顯微水蟎幼蟲的暗場圖像

暗場顯微鏡圖像——有絲(si) 分裂蔥根尖

需要阻擋通常穿過樣品和環繞樣品周圍的大部分光線，僅(jin) 允許傾(qing) 斜光線照射在樣品上。暗場聚光鏡的頂部透鏡為(wei) 球形凹麵，其允許從(cong) 頂部透鏡表麵發射的光線形成一個(ge) 倒置空心圓錐體(ti) ，並將焦點集中在樣品平麵上。在沒有樣品且聚光鏡數值孔徑大於(yu) 物鏡的地方，傾(qing) 斜光線會(hui) 相互交叉並錯開物鏡，從(cong) 而讓這些區域變暗。將標本（尤其是未染色且不吸收光線的標本）放在載玻片上時，傾(qing) 斜光線會(hui) 與(yu) 標本發生相互作用，並被諸如細胞膜、細胞核和內(nei) 部細胞器等標本內(nei) 部的要素所衍射、反射和/或折射。這些微弱的光線就會(hui) 進入物鏡。zui終效果就是在黑色背景上呈現出明亮的標本圖像。

通常情況下，在適於(yu) 暗場照明成像的觀察對象看上去非常絢麗(li) 。在明場顯微觀察中本身對比度非常低的標本往往在暗場觀察時非常耀眼奪目。暗場照明特別適合顯示輪廓、邊緣、邊界和折射率梯度。暗場照明的理想候選對象包括微小的水生生物、矽藻、小昆蟲、骨、纖維、頭發、未染色的細菌、酵母、組織培養(yang) 細胞和原生動物。適合暗場觀察的非生物標本則包括礦物和化學晶體(ti) 、膠體(ti) 顆粒、粉塵計數標本、以及包含細小夾雜物、孔隙率差異或折射率梯度的聚合物和陶瓷薄片。

使用暗場顯微觀察存在哪些挑戰？

在製備用於(yu) 暗場顯微觀察的標本時必須特別當心，原因是位於(yu) 焦平麵上方和下方的特征會(hui) 散射光線並導致圖像質量下降。載玻片的清潔度是影響成像的重要因素，在暗場照明中，由於(yu) 細微碎屑均會(hui) 被照亮，並且讓你無法看清想要觀察的部分，因此其重要性更甚。

暗場顯微鏡與(yu) 高光譜成像相結合，為(wei) 研究組織、活細胞或溶液中的納米材料提供了一種有效的方法。來自等離子體(ti) 或其他納米結構的散射光提供了有關(guan) 其組成，大小和分布的有用信息。

Photon等為(wei) 高光譜暗場成像提供了兩(liang) 種不同的平台：可調諧激光源（TLS）允許在激發中濾波和IMA，一個(ge) 提供發射濾波的平台。

TLS由兩(liang) 個(ge) 模塊組成：超連續源（寬帶源）和基於(yu) 光子等體(ti) 積布拉格光柵（VBG）技術的激光線可調諧濾波器（LLTF-帶通濾波器）。IMA由高光譜成像濾光片超立方體(ti) 組成，也基於(yu) VBG。當與(yu) 配備暗場聚光鏡的研究級顯微鏡結合使用時，TLS和超立方體(ti) 可以將該顯微鏡轉換為(wei) 高光譜暗場設置。這些係統在可見光（400-1000nm）、NIR（900-1620）nm或兩(liang) 者（400-1620nm）光譜範圍內(nei) 連續可調諧。這種zui先jin的平台允許對納米材料進行深入表征，而無需任何特殊的樣品製備。

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相關(guan) 文獻：

[1] Patskovsky, S., Bergeron, E., & Meunier, M. (2013). Hyperspectral darkfield microscopy of PEGylated gold nanoparticles targeting CD44-expressing cancer cells. Journal of Biophotonics, 8(1–2), 162–167.

[2] https://www.ruf.rice.edu/~bioseslabs/methods/microscopy/dfield.html

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