在傳(chuan) 統的拉曼光譜中,許多拉曼活性分子在激發後也表現出熒光,這在複雜的樣品中經常會(hui) 遇到。此外,熒光光子可以誘導一個(ge) 強背景,也提高了整體(ti) 鏡頭噪聲,掩蓋了更弱的拉曼信號。與(yu) 微弱的拉曼信號相比,較強的熒光背景使得拉曼光譜的采集困難,導致采集時間較長。
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拉曼光譜中熒光抑製方法的主要類別
拉曼光譜在大多數国产成人在线观看免费网站中的一個(ge) 嚴(yan) 重問題是強熒光背景,這部分歸因於(yu) 拉曼光譜的低截麵散射。在激光激發下,熒光與(yu) Stokes Raman散射同時發生,因為(wei) 紅移的Stokes Raman散射與(yu) 熒光發射光譜重疊。反斯托克斯拉曼散射不存在熒光問題,因為(wei) 與(yu) 激發波長相比,反斯托克斯拉曼散射是藍移的,因此在光譜中與(yu) 熒光自然分離。當用可見光激發時,熒光本底問題更為(wei) 嚴(yan) 重。拉曼光譜中的強熒光信號直接影響拉曼測量的準確性和靈敏度。
熒光和自發拉曼信號在波長維度上重疊,因此不能用簡單的濾光片分離。幸運的是,它們(men) 在以下性質上有所不同,這是許多拉曼測量中熒光抑製方法的基礎:
1.熒光發射壽命(納秒量級)遠長於(yu) 拉曼散射壽命(皮秒量級)。這一原理產(chan) 生了各種時域方法,其中一個(ge) 超快脈衝(chong) 激光器用於(yu) 激勵,可国产成人在线观看免费网站於(yu) 時域拉曼光譜係統,需要注意的是,激光脈衝(chong) 不應該太短,因為(wei) 小於(yu) 1ps的脈衝(chong) 不太單色,這會(hui) 導致光譜分辨率的嚴(yan) 重損失。超快光脈衝(chong) 序列激發樣品晚到熒光發射後的快到拉曼散射光可以被短時分離。
2.當激發光在高頻率下進行調製時,熒光和拉曼信號壽命的差異可以轉化為(wei) 比拉曼信號更大的相位延遲和幅值解調熒光。這一原理是所有頻域方法的基礎。
3.拉曼光譜的波長隨激發波長的變化而變化,而更寬的熒光峰對激發波長不敏感。這種性質導致了各種波長域方法,如位移激發拉曼差分光譜(SERDS)。
4.拉曼峰的帶寬比熒光峰窄得多。這一特性導致了各種基於(yu) 算法的基線校正方法,用於(yu) 采集數據後的熒光背景去除。
5.當分子與(yu) 金屬等納米粒子直接接觸時,熒光背景會(hui) 被有效猝滅,拉曼信號會(hui) 顯著增強。這一事實導致了表麵增強拉曼光譜(SERS)的快速發展。SERS可以通過熒光團和金屬納米粒子(NPs)之間的相互作用增強或減弱熒光發射強度,這取決(jue) 於(yu) 金屬納米粒子的形狀、熒光團分子偶極矩的方向以及熒光團發射光譜與(yu) 金屬納米粒子表麵等離子體(ti) 共振光譜的重疊。
6.當激發光的頻率接近分子的電子躍遷時,拉曼信號可以大大增強,在熒光中占主導地位。這種現象是由於(yu) 拉曼光譜的光譜選擇規則,導致共振拉曼光譜。一些非線性技術,如相幹反斯托克斯拉曼光譜和受激拉曼光譜(SRS)也可以顯著增強拉曼信號,同時最小化檢測到的背景熒光的比例。
7.其他抑製熒光的方法還包括偏振門控、采樣光學和幾何圖形、光漂白等。
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