多拉曼光譜的平行檢測已擴展到利用光譜儀(yi) CCD芯片的垂直和水平尺寸。它克服了一維檢測的限製,從(cong) 而大大提高了獲取多個(ge) 拉曼光譜的速度。關(guan) 鍵組件包括一個(ge) SLM和一個(ge) 快速快門裝置,該裝置從(cong) 不同的多聚焦模式組合中收集拉曼光譜。
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多聚焦拉曼光譜儀(yi) 的調製多焦探測方法
采用SLM技術生成多激光阱的m × n激光聚焦陣列。利用多通道ccd攝像機同時檢測捕獲的m × n個(ge) 單個(ge) 粒子的拉曼信號。雖然單個(ge) 拉曼光譜可以沿著CCD相機的垂直像素進行分辨,但在水平像素方向(沿光譜儀(yi) 的色散方向)上,光譜有明顯的重疊。為(wei) 了解決(jue) 這一問題,可使用一個(ge) 快門裝置來調製模式拉曼信號。
圖1
該檢測方案將能夠獲得不同組合的疊加拉曼光譜,然後對其進行分解,並允許在數據處理和分析後提取每個(ge) 焦點的單個(ge) 拉曼光譜。新的並行采集技術大大提高了共聚焦拉曼顯微鏡的成像速度。如圖1所示,SLM 通過調製單個(ge) 激光束的相位來產(chan) 生多個(ge) 激光焦點。785 nm的高功率二極管激光器作為(wei) 激光源。高NA物鏡60×用相位調製激光束在樣品平麵上產(chan) 生m × n激光聚焦陣列。6個(ge) 微粒被3 × 2激光聚焦陣列捕獲。捕獲粒子的拉曼散射信號通過二向色鏡從(cong) 激光中分離出來,經過透鏡和多縫陣列後,直接進入光譜儀(yi) 。
圖2
采用1340 × 100像素的多通道CCD 對所有捕獲粒子的拉曼光譜進行檢測。圖2為(wei) CCD相機捕獲的拉曼信號。通過調節兩(liang) 排激光聚焦陣列之間的間隔距離,可以很好地分離兩(liang) 排拉曼信號,沒有串擾。然而,每一行有三個(ge) 拉曼信號顯示了重疊和疊加,這是不可避免的。為(wei) 了分解每一行疊加的光譜並檢索單個(ge) 光譜,可使用調製多焦檢測技術進行光譜采集和重建。
圖3
調製多焦檢測的第一種方法是激勵多焦陣列的調製,如照明調製。一條線上使用三個(ge) 激光焦點(圖3(a))捕獲兩(liang) 個(ge) 3 μm聚苯乙烯珠(圖3(b))。當三個(ge) 激光聚焦都處於(yu) “開”狀態時,測得的拉曼信號是被困在兩(liang) 個(ge) 側(ce) 麵聚焦和來自中心激光聚焦的一個(ge) 背景中的兩(liang) 個(ge) 微珠的重疊拉曼光。通過用Matlab代碼對SLM進行編程,生成如圖3(c1)-(c3)所示的三種多焦模式,實現了調製多焦檢測。在每個(ge) 模式中,一個(ge) 激光焦點是關(guan) 閉的,而其他兩(liang) 個(ge) 激光焦點是“打開”的。捕獲每個(ge) 多焦模式對應的拉曼光譜Ii (i = 1,2,3),如圖3(d1)-(d3)所示。從(cong) 疊加拉曼光譜Ii中可提取單個(ge) 拉曼光譜Rj (j = 1,2,3),如2(R1) = I1 + I2 - I3, 2(R2) = I1 + I3 - I2, 2(R3) = I2 + I3 - I1。計算結果如圖3(e1)-(e3)所示。由於(yu) 獲得了三種調製的多焦模式,每個(ge) 激光聚焦的拉曼信號被采集了兩(liang) 次。因此每個(ge) 焦點的最終計算譜顯示了累積的總結果。通過對比圖3(e)和圖3(d)可以看到最終拉曼強度的增加。
圖4
調製多焦探測的另一種方法是在保持激光聚焦陣列不變的情況下對發射的拉曼信號陣列進行調製,即探測調製。SLM產(chan) 生一個(ge) 穩定的激光聚焦陣列,用於(yu) 連續捕獲和拉曼激發。在拉曼光傳(chuan) 播路徑上放置兩(liang) 個(ge) 透鏡,如圖4所示,在焦平麵上形成拉曼信號陣列。在目前的設計中,拉曼信號的調製是通過定製設計的掩模來實現的。掩模圖案安裝在一個(ge) 電動濾光輪上,並放置在兩(liang) 個(ge) 透鏡的焦平麵上。使用自定義(yi) 編寫(xie) 的MatLab程序同步切換濾光輪位置以改變掩模模式和CCD相機采集拉曼圖像。
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