熒光顯微鏡是一種核心的生物醫學成像工具，可提供活體(ti) 樣本分子對比的高分辨率圖像。生物係統中含有豐(feng) 富的內(nei) 源性熒光團，這些熒光團以一種方便、無標記的方式用於(yu) 自熒光分子成像。
tcspc技術在熒光壽命成像顯微鏡中的国产成人在线观看免费网站
熒光壽命成像顯微鏡(FLIM)利用熒光的壽命特性，因其對分子環境和分子構象變化的高度敏感性而得到廣泛国产成人在线观看免费网站。FLIM已廣泛国产成人在线观看免费网站於(yu) 研究細胞代謝的自熒光分子成像。自熒光分子的FLIM以非破壞性的方式提供了對細胞健康的獨特見解，經常用於(yu) 研究活體(ti) 動物。
FLIM有利於(yu) 探測熒光團的分子環境，以了解光強測量無法闡明的熒光團行為(wei) 。圖1中概述了時域和頻域的FLIM測量，並在下麵進行詳細描述。簡單地說，時域熒光壽命測量使用短脈衝(chong) 光進行激發(相對於(yu) 樣品的壽命較短)，然後直接(即通過門控檢測或脈衝(chong) 采樣)或使用時間分辨電子技術記錄熒光分子的指數衰減如圖1(a)及1(b)。另外，頻域技術也可以測量熒光壽命如圖1(c)和1(d)。這裏，激勵是連續的，隨著時間的推移，振幅調製為(wei) 正弦波。熒光信號的相位和振幅隨激發波的變化而變化。通過繪製在一定調製頻率範圍內(nei) 的相位變化，可以看到熒光團的相位延遲和振幅調製如圖1(d)。得到的熒光正弦信號可以在頻域解調，以量化熒光強度指數衰減引起的延遲。
圖1
FLIM常見的實現是使用一種稱為(wei) TCSPC的快速電子方法如圖1(a)。在TCSPC中，一個(ge) 快速秒表測量一個(ge) 激發光子和發射光子。這個(ge) 時間定義(yi) 了每個(ge) 發射光子的到達時間。用時間-幅值轉換電路(TAC)對快時鍾時間進行實驗測量，該電路將光子到達時間轉換為(wei) 可記錄的模擬電壓。在傳(chuan) 統的TCSPC中，在高光子計數率下，由於(yu) 儀(yi) 器的死區時間，大多數入射光子將無法被測量。這將導致堆積效應，即每個(ge) 激發脈衝(chong) 隻記錄到達時間較短的光子。光子的損失與(yu) 較長的到達時間將產(chan) 生一個(ge) 不正確的光子直方圖，導致測量的熒光壽命的整體(ti) 縮短。為(wei) 了避免這些影響，探測器上的光子計數較低是可取的，理想情況下<10%的激勵重複率。因此，通常情況下，時域方法通過多個(ge) 激勵脈衝(chong) 檢測一個(ge) 熒光光子，因此需要多個(ge) 激勵脈衝(chong) 來構建直方圖如圖1(a)及1(b)。通過光子計數測量的FLIM的信噪比，(SNR)取決(jue) 於(yu) 每個(ge) 像素(N)檢測到的光子數量，因此它隨N的平方根而變化。
因此，為(wei) 了改進FLIM的信噪比，光子探測過程重複數千次，生成熒光光子到達時間的分布，即測量到的指數熒光衰減，提高了通過曲線擬合的FLIM數據分析的準確性。
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