CRS成像對內(nei) 源性化合物的靈敏度一般在1 ~ 10 mM之間。使用拉曼標簽，通常具有更高的拉曼橫截麵，可以將靈敏度提高到~ 100 μ m範圍。雖然令人印象深刻，但這一檢測限往往高於(yu) 細胞內(nei) 小分子和代謝物的濃度。因此，如果能找到提高靈敏度的方法，CRS顯微鏡的国产成人在线观看免费网站空間將顯著擴大。
提高相幹拉曼成像靈敏度的方法
由於(yu) 照射到樣品表麵的光功率受到樣品損傷(shang) 閾值的限製，提高CRS顯微係統靈敏度的可行方法就是增加分子響應器的有效拉曼截麵。對於(yu) 內(nei) 源性化合物，拉曼截麵是分子的固有性質，當激發波長遠離電子共振時，拉曼截麵基本上不會(hui) 改變。然而，對於(yu) 外部探針，當電子共振出現在激勵束的頻率附近時，拉曼截麵可以顯著提高。
共振拉曼散射原理可国产成人在线观看免费网站到CRS係統的光激發中，達到相應提高分子濃度的檢出限的作用。這一方法要求發色團表現出與(yu) 電子共振良好耦合的振動模式。如受激拉曼散射係統(SRS)所示，當激發頻率在電子躍遷附近調諧時，為(wei) 熒光標記目的開發的熒光團顯示高達
倍的振動響應的出色增強。結果是這種熒光探針可以通過CRS工藝在亞(ya) 微米濃度下檢測到。這是重要的，因為(wei) 它開辟了在多標簽樣品中映射不同探針的可能性，不同探針的數量受限於(yu) 拉曼線的帶寬，而不是熒光的帶寬。由於(yu) 檢測通道之間的串擾，在熒光顯微鏡中使用四個(ge) 以上探針標記樣品具有挑戰性，而在共振增強SRS成像中，多探針標記可以擴展到數十個(ge) 不同的探針。就多重成像而言，這種能力是一個(ge) 巨大的勝利，因為(wei) 許多細胞生物學研究需要多個(ge) 分子參與(yu) 者的可視化來揭示細胞內(nei) 的過程和途徑。
通過共振增強SRS提供的多路複用能力可以進一步推動到更低的探針濃度。通過讓探針選擇性僅(jin) 由SRS激發過程決(jue) 定，原則上可以放寬檢測端的帶寬。這意味著在拉曼躍遷之後，分子可以在第②步中被激發到發射電子狀態，允許通過熒光發射有效地檢測發色團。如果電子躍遷以成功的拉曼躍遷為(wei) 條件，則可以根據其狹窄的拉曼帶選擇發色團，同時通過熒光檢測策略提高探測靈敏度。這一過程被稱為(wei) 受激拉曼激發熒光(SREF)，它使檢測濃度低至單分子限度的分子成為(wei) 可能，SREF方法結合了SRS提供的多重成像優(you) 勢和熒光顯微鏡的高靈敏度，使迄今為(wei) 止僅(jin) 使用這兩(liang) 種技術都無法進行的成像研究成為(wei) 可能。
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