拉曼光譜在不同成像模式下的主要優(you) 勢是它可以無標簽地進行，因為(wei) 它可以測量生物分子中化學鍵的固有振動。這種無標記方法的優(you) 勢是顯而易見的，因為(wei) 它提供了分子水平的信息，而不需要大量的樣品製備或修改。然而對於(yu) 特殊條件下或者特殊分子結構的樣品，人們(men) 發現使用拉曼“標簽”可以更有效的檢測拉曼信號。
拉曼檢測中使用的“標簽”
無標簽拉曼光譜已被用於(yu) 研究各種生物樣品中的蛋白質、脂類、核苷酸和不同的生物活性分子。原則上，由於(yu) 這些鍵的普遍存在，蛋白質、脂類、核苷酸、碳水化合物和其他生物分子可以同時被可視化。然而，在實踐中，所有含有相同鍵的分子都會(hui) 產(chan) 生重疊的光譜，這使得將來自特定化學鍵的信號歸因於(yu) 獨特類型的生物分子非常具有挑戰性，嚴(yan) 重限製了檢測的特異性。為(wei) 了克服這個(ge) 問題，不同的拉曼標簽已經被開發出來。這些標簽是在45000px−1到2800 cm−1之間的“沉默區域”振動的小功能基團或同位素，在該區域內(nei) 沒有自然發生的生物分子振動。用拉曼標簽標記特定的生物分子可以很容易地將其與(yu) 其他生物分子區分開來，增加檢測的特異性。這些標簽可以分為(wei) 兩(liang) 大類:同位素取代基和微小官能團。
第①種標簽同位素取代是可以引入的對生物分子性質擾動較小的直接的修飾方法之一。在拉曼光譜中，在代謝前體(ti) 中引入2H或13C同位素，以特異性地標記感興(xing) 趣的分子。因為(wei) C-H鍵存在於(yu) 幾乎所有的生物分子中，同位素替代理論上可以標記蛋白質、脂類、核苷酸和碳水化合物。然而，雖然它們(men) 提供了非常低擾動的檢測特異性，但這些小同位素標簽的拉曼信號非常弱。因此，在實踐中，它的使用通常局限於(yu) 含有幾個(ge) C-H鍵的非常豐(feng) 富的生物分子，通常是氨基酸和脂類，否則這些分子很容易被更大的標簽擾亂(luan) 。
第二種標簽包括微小的官能團，如丁腈或炔基團。這些標簽提供了尖銳而強的拉曼峰--一個(ge) 丁腈基團的信號強度相當於(yu) 11個(ge) C-2H鍵，而炔的信號強度是這個(ge) 的兩(liang) 倍多——產(chan) 生了大信號低濃度。然而，由於(yu) 它們(men) 更大的尺寸，它們(men) 可能會(hui) 對生物分子進行結構上的改變，並要求對修飾分子的生物活性進行測試。丁腈標簽在生物係統中有多種国产成人在线观看免费网站，近期報道了帶有丁腈標簽的可光開關(guan) 拉曼探針。理論上，這為(wei) 超分辨率拉曼顯微鏡技術的發展打開了大門，相當於(yu) 廣泛国产成人在线观看免费网站於(yu) 熒光顯微鏡的STORM或PALM方法。超分辨率拉曼成像一直是人們(men) 追求的目標，盡管目前取得了一些有趣的突破，但新的超分辨率方法的開發仍然是該領域的熱點。
與(yu) 腈相比，炔標記提供了兩(liang) 倍以上的信號強度，並且根據炔在生物分子中的定位，其拉曼信號漂移——末端炔出現在約2100 cm−1處，內(nei) 部炔出現在約2200 cm−1處——如果選擇適當的標記定位組合，就可以對不同的炔標記分子進行多路成像。由於(yu) 這些原因，炔標記是目前国产成人在线观看免费网站廣泛的拉曼標記策略，並已被用於(yu) 研究脂類、蛋白質、糖和核苷酸。
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