顯微鏡技術隨著多年的發展已經相當成熟，熒光顯微觀察是七種顯微觀察方式之一，而近些年激光技術的發展極大的提升了熒光顯微鏡
的成像效果。
現在大家所常見的普通光學顯微鏡是在16世紀末期在荷蘭(lan) 發明的，當時的顯微鏡非常的簡陋，隻是由兩(liang) 片凸透鏡組合而成的，在幾十
年之後意大利科學家伽利略才真正意義(yi) 上第一次在科學上使用顯微鏡，隨著光學顯微鏡的發展，顯微鏡的組成結構越來越複雜，顯微鏡
的功能越來越強大，顯微鏡的分辨率也越來越高，隨之顯微鏡也有了多種觀察方式。
在現在成熟的商業(ye) 顯微鏡上，分別有七種顯微觀察方式來對應不同類型的顯微鏡，並且同一台顯微鏡也可以配備多種顯微觀察方式，顯
微鏡的七種觀察方式分別是，明視野觀察（Bright Field BF）也叫明場，暗視野觀察（Dark Field）也叫暗場，相差檢測法（Phase
contrast PH），偏光顯微鏡（Polarizing，micoscope），浮雕相稱顯微鏡（RC HMC）也叫霍夫曼（Hoffman）顯微鏡，微分幹涉
檢測（Differential interference contrast DIC），以及今天我們(men) 要說的熒光觀察（fluorescence Microscope）
要介紹熒光顯微鏡，我們(men) 需要先簡單介紹一下熒光原理：
在光的照射下，具有熒光特性的物質的電子在吸收能量後，可由低能級電子層躍遷到高能級電子層。高能態的電子是不穩定的，它會(hui) 在
極短的時間內(nei) （10-8s），以輻射光的形式釋放能量後，回到原來的能態。這時發出的光即為(wei) 熒光（fluorescence），其波長比激發光
的波長要長，原理如圖2-6所示。利用物質對光吸收的高度選擇性，可製成各種濾片，吸收一定波長範圍的光或允許特定波長的光通
過，用來激發不同的熒光素，產(chan) 生不同顏色的熒光。
對於(yu) 熒光的激發波長一般都在紫外和可見波段，而對於(yu) 熒光的發射波段一般都在可見光波段
觀察熒光一般都采用落射熒光觀察方式，就是激發光是由顯微物鏡照射到樣品上，而不是大家常見的在樣品下方進行透射照明的方式，
當然也存在一些使用透射熒光的觀察方式，但是一般來說熒光的發射光是在樣品360度方向都有發射光，而且發射光的強度隻有激發光
強度的千分之一到百萬(wan) 分之一的量級，如果跟激發光同方向檢測的話，會(hui) 很大程度上幹擾檢測，成像的信噪比很差，甚至噪聲幹擾信號
會(hui) 強於(yu) 有效信號。
圖中就是落射熒光顯微鏡的示意圖
在熒光激發方麵，我們(men) 可以使用汞燈，LED燈等這類常見的照明光源來進行熒光激發，但此類照明方式有著明顯的缺點，在使用第一濾
光片濾出單色光之後，其光強度非常的低，使得熒光信號強度也大幅降低，並且此類光源強度隨著使用時間會(hui) 有非常明顯的功率下降，
此類光源一般使用壽命也都不長，現如今隨著激光技術發展成熟，現在的熒光顯微成像大都會(hui) 使用激光作為(wei) 激發光源，使用Oxxius多
波長合束激光器來進行熒光激發，使用多波長合束激光器來進行熒光熒光激發會(hui) 有非常好的激發光強度，激發光功率連續可調，不需要
加減光片來調節光強度，並且可以對激光進行高達兆赫茲(zi) 級別的高速調製，這一點在某些超分辨顯微成像方式裏有著顯著的優(you) 勢，而且
因為(wei) oxxius合束激光器是線偏振激光，還可以進行某些熒光材料的偏振熒光分析。
在落射熒光顯微鏡中，除了光源，還有一個(ge) 比較重要的組成部分就是熒光濾色塊，它是由一片激發濾色片（一般是帶通濾色片），一片
二向色鏡和一片發射濾色片（一般是長通濾色片）組成的，如圖所示：
在使用不同的熒光染料時，需要配和不同的熒光濾色塊去使用，但如果使用激光就可以去除激發濾色片，隻需要二向色鏡和發射濾色片。
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