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提高分辨率和速度:聲光組件如何改變共聚焦顯微鏡

發布時間:2023-10-07 16:30:30 瀏覽量:3209 作者:Robert

摘要

G&H生命科學副總裁Lars Sandström發表在《生物光子學》雜誌1月/2月刊的文章中回顧了聲光器件在共聚焦顯微鏡及其可選項中使用以及克服成像深度、分辨率和速度的限製。

正文


提高分辨率和速度:聲光組件如何改變共聚焦顯微鏡


Lars Sandström在這篇文章中討論了如何在共聚焦顯微鏡中使用聲光偏轉器(AOD)來解決(jue) 傳(chuan) 統共聚焦和多光子顯微鏡技術的的一些局限。


老鼠海馬體(ti) 中的位置細胞(青色)及其中間神經元的局部回路(深藍色)。由Tristan Geiller/Losonczy實驗室/哥倫(lun) 比亞(ya) 的Zuckerman研究所提供。


共聚焦顯微鏡使用CW激光束,將其聚焦到含有熒光染料或蛋白質的組織樣本內(nei) 的一個(ge) 小束腰上(微米級寬度)。所產(chan) 生的熒光穿過顯微鏡物鏡,然後聚焦在位於(yu) 高增益光電探測器前麵的針孔上。這個(ge) 共聚焦孔阻擋了任何不是來自激光束腰的xyz位置的光。通過掃描束腰和/或移動樣品,可以獲得水平或垂直的圖像切片甚至整個(ge) 圖像立方體(ti) ,並且可以在多個(ge) 深度捕獲熒光。


多光子顯微鏡是一種利用大數值孔徑光學聚焦超快激光的相關(guan) 技術。激光波長設置為(wei) 目標熒光團常規激發所需波長的兩(liang) 倍。在且僅(jin) 在束腰處,聚焦的峰值光強超過雙光子激發的閾值。這提供了固有的3D分辨率,並消除了對有損耗的共聚焦孔的需要。


然而,這兩(liang) 種技術都受到實際成像中的需要取舍的負麵影響,例如以捕獲代謝過程所需的幀率在組織內(nei) 部進行更深層次成像的能力。此外,由於(yu) 顯微鏡光學器件的像差,或者更隱蔽地,由樣品組織本身的光學性質,分辨率可能會(hui) 受到負麵影響。


Sandström解釋說,將聲光偏轉器(AOD)運用在共聚焦顯微鏡中,代替傳(chuan) 統的振鏡掃描激光來解決(jue) 這些限製。在聲光結構中,聲波被国产成人在线观看免费网站於(yu) 某些類型的光學透明材料,如晶體(ti) ,引起材料折射率的變化。這種折射率的變化使穿過材料的光發生偏轉。通過国产成人在线观看免费网站時變聲波,偏轉角度可以迅速改變,允許快速和精確的掃描激光束。


AOD可用於(yu) 掃描x和y軸的激光束,包括任意感興(xing) 趣的路徑,可以提供樣品的高速,高分辨率的掃描。這可以顯著提高共聚焦和多光子顯微鏡的成像深度和速度,使實時捕獲代謝過程和其他動態過程成為(wei) 可能。此外,AOD可用於(yu) 調製激光束的強度,從(cong) 而可以在光柵掃描期間執行消光,這有助於(yu) 進一步提高分辨率。


在聲光偏轉器中,壓電換能器在材料中產(chan) 生布拉格光柵光闌隻允許經過衍射的光束通過。由G&H提供。


綜上所述,聲光和其他有源光子元件集成到顯微鏡中的zui新發展開始解決(jue) 共聚焦和多光子顯微鏡技術的局限性,為(wei) 生命科學研究開辟了新的機遇。在共聚焦顯微鏡中使用聲光偏轉器 (AOD)已被發現是解決(jue) 成像深度,分辨率和速度限製的有前途的解決(jue) 方案。這可以顯著提高實時捕獲代謝過程和其他動態過程的能力,為(wei) 生物體(ti) 的內(nei) 部工作提供新的見解。


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