微生物汙染是由於(yu) 環境中微生物的存在和繁殖而產(chan) 生的。在藥品製造行業(ye) ,生物汙染是一個(ge) 醫學問題,可導致藥物降解和藥效降低,這使得監管機構要求對微生物進行連續、常規或定期的環境監測,以確保生產(chan) 活動期間的環境得到精確控製,以保護患者免受潛在外來物質的接觸。該行業(ye) 利用不同的方法來控製製造室的環境,表麵,牆壁使用嚴(yan) 格的清潔過程,天花板屋頂HEPA過濾器來控製空氣和顆粒,設備來監測清潔過程的有效性和人員樣本,以確保人們(men) 的無菌技術過程是足夠的。這些技術需要很長的時間,從(cong) 在該地區收集樣品到在培養(yang) 基中接種大約12到24小時,以允許微生物生長。一旦潛伏期結束,細菌的鑒定和特征就從(cong) 檢查菌落形態開始,然後進行革蘭(lan) 氏染色的顯微鏡分析。
利用中紅外激光光譜和多變量分析對生物製藥工業(ye) 中常見微生物的檢測和表征
問題:
經典的微生物鑒定方法是基於(yu) 耗時和勞動密集型的方法。篩選技術要求對分離的細菌進行快速和分組。
建議的解決(jue) 方案:
利用(QCL-GAP)量子級聯激光掠角探針,對生物製藥行業(ye) 潔淨室中使用的不鏽鋼類底物上沉積的金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和黃體(ti) 微球菌三種細菌進行加速檢測、鑒定和區分。
一.實驗設計国产成人在线观看免费网站
通用国产成人在线观看免费网站程序:
1. 表麵上含有微生物的薄膜。
2. 適用於(yu) 環境采樣,清潔驗證和生物技術行業(ye) 等。
3. 檢測化學和生物威脅劑沉積在表麵,重要的是快速檢測,預防汙染的早期階段。
4. 有機化合物的鑒定。
5. 混合物中雜質的鑒別。
6. 構象分析。
掠角探頭的国产成人在线观看免费网站:
1. 近掠入射成為(wei) 表麵分析有力的技術。
2. 包括微生物在內(nei) 的化學和生物單層的研究。
3. 提高靈敏度,提高信噪比。
4. 單個(ge) 分析物的檢出下限(10-50 ng/cm2)。
5. 金屬表麵API混合物分析。
6. 高分辨的振動信號,允許分離分析物信號使用多元化學計量程序。
二.儀(yi) 器儀(yi) 表及參數
1. 基於(yu) QCL技術的QCL- gap預色散光譜儀(yi) (LaserScan™,Block engineering, LLC, Marlborough, MA, USA)
2. 采用反射吸收測量法在細菌懸浮液(BSS)的MIR: 5.4 ~ 12.8 μm範圍內(nei) 進行數據采集。
3. 采用4 cm-1的光譜分辨率收集振動響應。
4. 光譜儀(yi) 內(nei) 部配備了一個(ge) 熱電汞鎘碲(MCT)探測器和一個(ge) 2 × 4 mm2的MIR激光束。兩(liang) 個(ge) 可調金鏡,允許激光以掠射角(~82°)入射,一個(ge) 朝向樣品,另一個(ge) 反射來自樣品的光,允許雙重。
三.材料/試劑和製備/條件
材料和試劑:
1. 三種分離的環境細菌(金黃色葡萄球菌(Sa)、表皮葡萄球菌(Se)和黃體(ti) 微球菌(Ml))。
2. 使用MALDI-TOF進行細菌認證和鑒定,並進行補充測試,以MALDI-TOF確認進行細菌鑒定為(wei) 例。
3. 通過塗布板進行濃度驗證,並確定所述細菌所需的培養(yang) 條件。
4. 以50 EU/0.1mL的濃度凍幹。
5. 用於(yu) 樣品沉積的不鏽鋼(SS)襯底(2in x2in)是一種等級材料,類似於(yu) 生物製藥行業(ye) 潔淨室中使用的材料。
準備和條件:
1. 用微生物国产黄色在线观看提供的重組緩衝(chong) 液對細菌進行重組。
2. 取10 mL菌液配於(yu) 90mL胰蛋白酶肉湯(TSB)中。
3. 細菌在30 - 35℃下孵育24小時。
4. 基材(2X2英寸)用異丙醇清洗,並留在化學罩中幹燥。
5. 在2 × 2-in不鏽鋼(SS)板上沉積20µL的純細菌和混合細菌樣品
6. 使用細菌樣品Sa、Se和Ml配製如下混合物:Sa/Se、Sa/Ml和Se/Ml
7. 使用微移液針尖(直徑約1mm)塗抹技術將樣品沉積到基板上
四.結果分析
1. 研究結果表明,QCL-GAP在788 ~ 1884 cm-1範圍內(nei) 對所研究的細菌種類Sa、Se和Ml產(chan) 生了高質量的光譜信息。
2. 雖然所調查的細菌屬於(yu) 同一科,但QCL-GAP提供的信息有足夠的數據來區分細菌混合物和純細菌。
3. 不同組合的PCA,傾(qing) 向於(yu) 觀察定位在純菌組合橢圓之間的混合橢圓。
4. 建立PLS-DA模型,每次識別一種微生物,結果表明,平均99.2%的微生物分類正確。
5. 本研究證明了QCL-GAP結合PCA對同一科細菌的鑒別能力。
利用QCL-GAP對細菌進行分析的新方法的發展,為(wei) 檢測微生物提供了快速、準確的分析,並為(wei) 區分相似類型的微生物提供了巨大的潛力
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