時間聚焦多光子激發顯微鏡（Temporal focusing multiphoton microscopy）是一種保持深度分辨率同時高度並行多光子顯微鏡。傳(chuan) 統的時間聚焦寬視場配置存在軸向分辨率不佳的問題。而使用數字微鏡器件(DMD)可實現線掃描的時間聚焦方案，對傳(chuan) 統方案優(you) 化：動態並行掃描（成像速度）提高軸向分辨率。這種方案可有效提高顯微鏡分辨能力。
DMD在雙光子激發顯微鏡中国产成人在线观看免费网站
時間聚焦是一種高度並行的激光激發技術，廣泛国产成人在线观看免费网站於(yu) 細胞動態成像、光遺傳(chuan) 學和微製造等領域。雖然時間聚焦多光子激發顯微鏡能在寬視場成像，但在軸向分辨率方麵傳(chuan) 統點掃描多光子顯微技術更占優(you) 勢。一種改進方式是采用線掃描的工作方式，將光線聚焦到線中來對激發平麵進行圖形化，提高軸向分辨率。而使用DMD可以有效實現對光的快速空間調製，在激發麵形成動態圖樣。同時由於(yu) DMD的圖樣可編程性，可以控製線寬，也可以同時照明多條線，並快速掃過樣品。這有利於(yu) 實際實驗中平衡照明區域和軸向分辨率的不同需求。
上圖為(wei) 實驗裝置示意圖。激光束經過反射光柵衍射，通過兩(liang) 個(ge) 凸透鏡將經過衍射的光束投射在DMD的微鏡陣列上。由DMD對光束空間調製後，光束被濾光片反射到物鏡，將DMD圖樣聚焦到樣品中。
實驗使用綠色熒光量子點樣品比較廣域時間對焦和基於(yu) DMD的線掃描時間對焦技術的軸向分辨率。DMD選取不同寬度的條紋圖樣對比結果，條紋寬度3像素直到全部像素（全亮）。
寬場時間聚焦激發(紅點)和線掃描時間聚焦激發(藍點)的z軸綜合熒光強度分布圖比較。DMD的尺寸為(wei) 128 × 128像素，寬視場測量為(wei) “on”，行掃描模式為(wei) 128 × 3像素序列為(wei) “on”。數據擬合為(wei) 洛倫(lun) 茲(zi) 函數(實線)。
上圖比較兩(liang) 種方案在z軸上的分辨能力，線掃描照明的FWHM比寬場照明明顯減少，表明線掃描軸向分辨率有提高。
使用花粉顆粒作為(wei) 樣品比較：
花粉粒的雙光子時間聚焦熒光圖像。花粉顆粒的圖像為(wei) 寬場、128 × 128 個(ge) "開"像素和 8 行 128 × 3 個(ge) "開"像素。花粉顆粒在Z大熒光強度下由廣域和線掃描模式的圖像分別顯示（a，b）。（c） 廣域（黑色）和花粉顆粒上的線掃描（品紅色）模式（a，b）。通過（c）可得到線掃描模式分辨能力更強。比較（a）（b），還可得知線掃描能夠消除寬場模式的“幽靈”條紋。“幽靈”條紋不是花粉的圖像特征，是儀(yi) 器組件互相幹擾產(chan) 生的現象。
使用DMD的線掃描時間聚焦雙光子激發顯微鏡相較於(yu) 傳(chuan) 統的的寬場時間聚焦雙光子顯微鏡，在軸向分辨率方麵有明顯提高。同時由於(yu) DMD的高速空間調製性能，可以完成並行線掃描（縮短成像時間），並自如根據實際實驗要求平衡視場寬度與(yu) 軸向分辨率（改變DMD圖樣）。
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