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模塊化光片顯微鏡(light sheet microscope)組件
選擇性平麵照明顯微鏡 (SPIM) 是一種快速、溫和的成像技術,它將寬場成像的速度與(yu) 適度的光學切片和低光漂白相結合。它已成為(wei) 一種重要的熒光成像方式,尤其是體(ti) 積成像。 SPIM 也稱為(wei) 光片熒光顯微鏡 (LSFM) 或簡稱為(wei) “光片”,光片顯微鏡因其具有光損傷(shang) 小、切片品質好、采集速率快的特點在體(ti) 積成像中迅速普及。
SPIM 的主要缺點是需要額外的光學器件來生成光片。常見的是,除檢測物鏡外,還需要一個(ge) 與(yu) 檢測物鏡正交放置的單獨的照明物鏡,其後連接生成光片的光學器件和激光源。本質上,顯微鏡需要圍繞樣品進行設計,添加額外的物鏡和光路會(hui) 給成像係統和樣品安裝帶來空間限製。傳(chuan) 統的共焦或落射熒光顯微鏡具有單一光路,可以容納更廣泛的樣品。換句話說,SPIM 的優(you) 勢是以任何單一工具的適用範圍更窄為(wei) 代價(jia) 的,這導致了不同光片顯微鏡配置的激增。
自 2010 年代初以來,国产成人在线观看免费网站科學儀(yi) 器 (ASI) 一直采用模塊化方法來構建顯微鏡, ASI 的模塊化組件彼此之間可以輕鬆組合,形成完整的 SPIM 顯微鏡,包括電動和壓電平台、光機械裝置以及用於(yu) 創建和移動光片的掃描儀(yi) 。完成該係統需要物鏡、激光器、濾光片和相機;我們(men) 提供多種標準配置的光片顯微鏡,包括 ISPIM、diSPIM、oSPIM 和 ct-dSPIM。此外,使用 ASI 的組件大大簡化了定製/DIY 光片係統的構建。
1)雙向倒置光片顯微鏡模塊(DISPIM)
DISPIM是一款靈活的易於(yu) 安裝的光片顯微鏡組件,該組件安裝到倒置顯微鏡上時可實現雙向觀測。該組件兩(liang) 個(ge) 物鏡垂直放置在開放式培養(yang) 皿的樣品上方,物鏡與(yu) 垂直方向成45°。該組件可以放置在常規倒置顯微鏡的頂部,也可安裝在我們(men) 提供的RAMM/MIM框架組件上。
該組件有兩(liang) 種配置:
①單麵係統(iSPIM)
該係統一個(ge) 物鏡通過常規的振鏡產(chan) 生移動光片,使光片穿過樣品,通過振鏡移動光片同時移動壓電物鏡掃描台完成3D成像。該係統圖像獲取樣品迅速,低成本,但是軸向分辨率低於(yu) XY平麵分辨率。
②雙麵係統(diSPIM)
在該係統中兩(liang) 邊都包含光片掃描儀(yi) 、壓電物鏡掃描台和相機,在實驗中兩(liang) 個(ge) 物鏡交替用於(yu) 照明和檢測,同時在正交方向獲得樣品的圖像,並且將兩(liang) 個(ge) 方向的收集的數據集進行計算合並生成各向同性的3D圖,如果實驗需要也可以單麵模式運行。該模塊XY&Z軸都具有較好的分辨率,但是需要購置更多的硬件,且後期需要更多的圖像處理。
2)透明組織專(zhuan) 用光片顯微鏡(ct-SPIM)
該光片顯微鏡的外形結構與(yu) diSPIM/iSPIM結構類似,但是不包括倒置顯微鏡。該係統配置經過優(you) 化可對透明組織進行成像。樣品放置在電動XYZ平台上,由於(yu) 樣品尺寸較大,平台掃描是其成像的可行方式。采集速度受相機幀頻限製。該模塊也是擁有兩(liang) 種不同配置,即單麵成像和雙麵成像係統。
3)傾(qing) 斜單麵光片顯微鏡(OSPIM)
OSPIM係統是一個(ge) 單麵光片係統,上麵物鏡以60°傾(qing) 角安裝在RAMM框架上,底測顯微鏡物鏡用於(yu) 產(chan) 生光片,該平台可以安裝在商業(ye) 上的倒置顯微鏡上。
此外還提供了搭建光片顯微鏡中常用的模組,
1)光纖耦合激光掃描儀(yi)
光纖耦合激光掃描儀(yi) 是一款緊湊而通用的2D掃描單元。設計適用於(yu) 生成SPIM光片。用戶提供的光束通過標準光纖連接器進入掃描儀(yi) ,通過二維MEMS掃描鏡掃描成光片。掃描儀(yi) 通常使用C型接口連接到顯微鏡上。
2)多重浸漬物鏡
該物鏡主要設計用於(yu) 光片顯微鏡檢查透明組織樣品。由於(yu) 物鏡具有獨特的第 一彎曲表麵,因此物鏡可以在沒有任何校正環的情況下工作在任何折射率的介質中。物鏡可以浸入到苛刻的介質,例如DBE和BABB。
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